Yağ Dokudan SVF İzolasyonu

Liposuction dokusundan Serva Collagenase ile Stromal Vascular Fraction (SVF) İzolasyon Protokolü

 

Collagenase kullanım solüsyonu hazırlama:

Buz ortamında liyofilize formda olan SERVA Collagenase NB 4 (Cat. No. 17454) veya NB6 GMP Grade (Cat. No. 17458) PBS ile sulandırın. 500 mg enzimi 10 ml PBS ile sulandırıp “stok solüsyonu” oluşturabilirsiniz. Kullanım solüsyonu oluşturmak için 1 ml stok solüsyonu 0,2 µm enjektör filtresinden geçirilir (NB6 GMP grade Collagenase steril olduğu için filtrasyona gerek yoktur). Üzerine 100 ml PBS eklenir. Böylece 0,5 mg/ml aktivitesinde collagenase “kullanım solüsyonu” elde etmiş oluruz.

 

Yıkama:

100 ml liposuction dokusu 4 adet 50 ml sterik konik santrifüj tipine 25 er ml olarak taksim edilir. Her bir tüpe 25 ml steril PBS eklenir. Hafifçe alt üst edilerek karıştırılarak yıkanır. Bir müddet beklenir, yağ doku üste çıkınca altta bulunan yıkama solüsyonu bir pipet ile uzaklaştırılır.

 

Enzimatik sindirme (digestion):

Her tüpe 25 ml Collagenase kullanım solüsyonu ekleyin ve 37C de 25 dk 225 rpm de karıştılmak sureti ile sindirme işlemi yapılır. Bu işlemi inkübatörlü karıştırıcı kullanarak yapabileceğiniz gibi, normal karıştırıcıyı bir inkübatör içine yerleştirmek sureti ile de yapabilirsiniz.

 

Saflaştırma:

Sindirme (digestion) aşaması sonrasında tüpler 1800 rpm de 5 dk santrifüj edilir. Santrüfüj sonrası en altta bulunan pelet halindeki SVF pipet aracılığı ile alınır ve 15 ml lik santrifüj tüpüne konur. Üzerine 15 ml PBS eklenir ve pipetaj yapılarak karıştırılır. Bu karışım 100 µm steril süzgeçten (cell strainer) geçirilir. Tekrar santrifüj edilir, üstteki kısım atılır. Altta kalan kısım saf SVF dur.


 
Dr. ZEYDANLI Hayat Bilimleri Tic. Ltd. Şti.• Oguzlar Mahallesi 1392. Sokak 21/5 06520 Balgat Ankara • Tel: 0312 285 85 40 • Fax: 0312 285 85 41
e-mail: info@drzeydanli.com.tr

Web Tasarım: AdaNET